Otimização da técnica de Espalhamento de Luz Laser (ELL) para análise do diâmetro da HDL em amostras de mulheres no climatério.

Abstract

A associação entre o climatério e o aumento do risco cardiovascular já está bem estabelecida sendo, em parte, atribuída a alterações desfavoráveis no perfil lipídico, principalmente, a diminuição da concentração da lipoproteína de alta densidade (HDL) e o aumento da lipoproteína de baixa densidade (LDL). A HDL atua no transporte reverso do colesterol (TRC), removendo o excesso de colesterol das células e tecidos periféricos para o fígado, desempenhando uma função ateroprotetora. Estudos mostraram a existência de subfrações da HDL que diferem no tamanho e estrutura. Além disso, também já foi demonstrado que as propriedades cardioprotetoras da HDL estão associadas com o tamanho da lipoproteína. Assim, é importante a padronização e otimização de métodos laboratoriais que permitam o isolamento e a determinação das subfrações da HDL permitindo melhor avaliação do risco cardiovascular. Este trabalho teve como objetivo otimizar a técnica de Espalhamento de Luz Laser (ELL) para a determinação do diâmetro da HDL em amostras de mulheres no climatério. Foram avaliadas amostras de 10 mulheres, na faixa etária de 40 a 65 anos. Após a coleta de sangue em tubo com EDTA e a separação do plasma, procedeu-se a precipitação química com polietilenoglicol (PEG) 8.000. Em seguida, o sobrenadante contendo HDL foi filtrado, de duas formas distintas: utilizando o filtro de membrana 0,22µm ou o filtro de papel quantitativo 1-2µm. O filtrado foi analisado pela técnica de ELL para a determinação do diâmetro da HDL. Também foi realizada a dosagem de HDL, colesterol total (CT) e triglicerídeos (TG) e calculada a concentração de LDL e de não-HDL. Não foi observada diferença significativa em relação ao diâmetro da HDL (9,66±0,28nm vs 10,63±3,49nm; p=0,413) e ao índice de polidispersão (0,24±0,01 vs 0,29±0,07; p=0,083) quando se utilizou os diferentes filtros, embora o desvio padrão em ambas as medidas tenha sido maior em amostras separadas com o filtro de papel. Também não foi encontrada associação significativa entre o diâmetro da HDL e a concentração dos analitos do perfil lipídico. Foi observada relação direta entre os níveis plasmáticos de HDL e o diâmetro da HDL. A otimização da técnica de ELL usando o filtro de papel não se mostrou eficiente, enquanto o filtro de membrana forneceu resultados coerentes para o diâmetro da partícula de HDL.