Quantificação tecidual do anti-chagásico benznidazol : aspectos regulatórios e técnicos no desenvolvimento de uma metodologia bioanalítica.

Abstract

O benznidazol (BNZ) é o único recurso disponível para o tratamento da doença de Chagas no Brasil. Apesar de ser utilizado desde a década de 1970, existem poucos estudos sobre a biodistribuição deste fármaco. É sugerido que sua variável eficácia na fase crônica se deva ao fato de apresentar limitada penetração tecidual. O presente estudo propõe discutir aspectos regulatórios e técnicos essenciais para o desenvolvimento de uma metodologia bioanalítica para quantificar o anti-chagásico benznidazol em amostras de matrizes biológicas caninas, já que, até então, não há registro de desenvolvimento ou validação de um método para análise de tecido de cães. Para tal, pesquisou-se, em literatura, estudos que descreviam técnicas de extração, separação e análise de BNZ em material biológico e comparou-se os critérios de validação preconizados pelas agências regulatórias do Brasil, Estados Unidos e Europa (Anvisa, FDA e EMA, respectivamente). Finalmente, foram selecionadas condições iniciais de extração e cromatográficas adequadas para o desenvolvimento do método bioanalítico de análise de biodistribuição do benznidazol. A técnica de extração mais recomendada foi a extração líquido-líquido: é simples, rápida, de baixo custo e possui boa recuperação, precisão e exatidão. A separação foi realizada pelo método cromatográfico CLAE (cromatografia líquida de alta eficiência) com detector de arranjo de diodos (DAD) no comprimento de onda de 324 nm. As soluções reagentes e as condições iniciais selecionadas para desenvolvimento do método foram: a acetonitrila (ACN) é ideal para ser usada tanto como solvente extrator quanto para fazer parte da fase móvel, em uma composição 30:70 de ACN:água; o volume de injeção foi de 20 µL, com vazão de 1,0 mL/min, utilizando coluna cromatográfica e pré- coluna C18; como padrão interno foi selecionado o fármaco omeprazol; as análises foram realizadas à temperatura de 40 °C.