Avaliação da toxicidade aguda in vivo, citotoxicidade e atividade tripanocida in vitro da lactona sesquiterpênica isolada de Lychnophora trichocarpha.

Abstract

A doença de Chagas (Dch) permanece epidemiologicamente relevante e é considerada negligenciada pela OMS, causando elevada morbidade e mortalidade em plena idade produtiva. O mais grave é a falta de terapia profilática adequada e de tratamento etiológico efetivo para esta enfermidade. Os únicos medicamentos atualmente utilizados são o benznidazol (BZ) e nifurtimox (NF). Estes fármacos são administrados em esquema prolongado, causam graves efeitos colaterais e apresentam limitada eficácia terapêutica. Tendo em vista, os resultados pré-clínicos obtidos por nosso grupo e o depósito das patentes (PI11063025 e WO/2013/05989) envolvendo a lactona sesquiterpênica (LS) licnofolida (Lic) nanoencapsulada (NC), que apresentou elevada eficácia anti-T. cruzi, inclusive em cepas 100% resistentes ao tratamento usual BZ e NF, reduzindo a cardiotoxicidade in vitro e in vivo, este projeto visa avançar nos estudos desta LS e formulação avaliando sua citotoxicidade in vitro em linhagens celulares cardíacas e hepáticas pelo método de Vermelho Neutro; os fenômenos de apoptose e necrose por coloração com Anexina V/iodeto de propídio por citometria de fluxo; possíveis interferências destes polímeros ou da LS no ciclo celular; realizar avaliação tripanocida contra formas amastigotas intracelulares e epimastigotas de T. cruzi; e também avaliar a toxicidade aguda in vivo da Lic-livre e Lic-NC em camundongos Swiss. BZ foi utilizado como grupo controle de referência para comparação. No teste de vermelho neutro, Lic-Livre e Lic-NC não se mostraram citotóxicas até 0,6 μg/mL em células H9c2 e até 2,4 μg/mL para as células HEPG2. Foi verificada maior interferência no ciclo celular de células H9c2 para a formulação nanoencapsulada quando comparada à LS livre. BZ foi o que apresentou maior alteração entre os grupos avaliados (200μg/mL e 400μg/mL). Não foi observado diferença significativa quanto às análises de apoptose e necrose para Lic-Livre e Lic-NC. Os testes em amastigota e epimastigota mostraram que Lic-Livre possui maior ação tripanocida in vitro quando comparada à Lic-NC. No teste de toxicidade aguda também não foi observado alterações significativas quanto os parâmetros avaliados. Dessa forma, licnofolida se mostrou eficaz em sua ação anti-T. cruzi, em sua forma livre e nanoencapsulada, com diminuição da citotoxicidade em NC quando comparadas. Ainda, em relação ao grupo controle BZ, Lic se mostrou menos citotoxica em todos os parâmetros avaliados. Assim, Lic-Livre e em nanocápsulas se mostraram seguras quanto ao uso em camundongos nas concentrações ótimas de uso da literatura.