Guia para desenvolvimento e otimização de métodos por cromatografia a líquido de alta eficiência para quantificação de fármacos.

Abstract

A cromatografia a líquido de alta eficiência (CLAE) é uma técnica de separação amplamente difundida, e seu princípio é baseado na eluição de uma fase móvel (FM) através de uma coluna recheada com uma fase estacionária (FE). Durante a descoberta de novos fármacos e na avaliação da qualidade e estabilidade de fármacos e medicamentos, métodos de separação e quantificação por CLAE são desenvolvidos ou otimizados. Para se obter um método adequado é necessário, se ter um conhecimento teórico prévio sobre a CLAE e as características físicoquímicas do analito ou fármaco, pois assim é possível fazer proposições de FM, FE, fluxo, volume de injeção, tempo total de análise e demais variáveis. A fim de avaliar se um método atende as exigências requeridas para o estudo, existem os parâmetros de adequação do sistema cromatográfico, que fornecem resultados que permitem ajustar as condições analíticas, dentre os quais estão: número de pratos teóricos (N), resolução (Rs), fator de cauda (TF) e desvio padrão relativo (DPR). Este trabalho visa descrever os parâmetros já existentes para adequação do sistema, as condições cromatográficas mais comumente empregadas, além de comparar as variações durante os procedimentos de desenvolvimento e otimização de métodos por CLAE por diferentes pesquisadores e de produzir um material bibliográfico com um fluxograma para que seja utilizado em posteriores estudos que necessitem de otimização ou desenvolvimento de um novo método para quantificação de fármaco isolado ou contido em formas farmacêuticas (FF). Para tanto, foram realizadas buscas bibliográficas nas principais bases de dados de periódicos sobre artigos que desenvolveram e otimizaram um método de quantificação por CLAE desde 2008, bem como buscas em livros. Observou-se a existência de diversas variações no procedimento para realização do desenvolvimento ou otimização, empregando diferentes condições, sendo que composição da fase móvel era a que sofria mais variações, e que a fase estacionária, dificilmente era mudada, provavelmente pela não disponibilidade de múltiplas colunas no laboratório onde se realizaram as análises. Ao final, foi possível constatar que não existe uma regra, mas que alguns passos durante os processos foram comuns em grande parte dos estudos, como o fato da escolha de uma FE baseada na estrutura química do analito. Todas as informações obtidas foram compiladas e isso possibilitou a proposição de um fluxograma para direcionar as escolhas de condições analíticas, a partir dos parâmetros de adequação do sistema cromatográfico, a fim de agilizar o desenvolvimento de método cromatográfico para quantificação de fármacos, além de minimizar gastos e geração de resíduos.