Vacina quimérica induz imunidade humoral e celular em camundongos BALB/c contra a leishmaniose visceral.

Abstract

A leishmaniose visceral (LV), uma doença infecto-parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania, com ampla distribuição em regiões tropicais. O Brasil concentra a maior parte dos casos nas Américas, tornando a LV um grave problema de saúde pública. A transmissão ocorre pelo mosquito-palha (Lutzomyia longipalpis), que infecta cães e humanos, sendo a presença de cães infectados um fator de risco relevante. As estratégias de controle da LV enfrentam desafios, como falhas no tratamento farmacológico, dificuldades na contenção do vetor e no controle dos cães infectados, tidos como “reservatórios naturais da doença”. Nesse cenário, a vacinação surge como uma alternativa promissora para reduzir a carga parasitária nesses animais, evitar a infecção e assim diminuir a transmissão da doença, protegendo tanto os cães quanto os humanos. No entanto, as vacinas disponíveis apresentam limitações, tornando necessário o desenvolvimento de novos imunizantes mais eficazes. Para desenvolver uma vacina é necessário levar em consideração a resposta imunológica natural frente à leishmaniose. Sendo assim, um candidato vacinal deve desencadear uma resposta imune do tipo TH1, na qual há geração de citocinas pró-inflamatórias e anticorpos específicos, garantindo a proteção do indivíduo contra a progressão da doença ao eliminar o patógeno. Dessa forma, o presente estudo tem como objetivo avaliar a imunidade humoral e celular mediada pela vacinação com a Quimera A (Qui-A) associada ao adjuvante Poly-ICLC em camundongos BALB/c contra LV . Os animais foram divididos em quatro grupos: (1) Salina, inoculados com solução salina estéril a 0,9%; (2) Adjuvante, recebendo apenas Poly-ICLC; (3) Qui-A, vacinados com a proteína quimérica; e (4) Qui-A/Poly-ICLC, vacinados com a proteína quimérica associada ao adjuvante Poly-ICLC. O protocolo de vacinação consistiu em três aplicações subcutâneas na região dorsal, com intervalos de 15 dias entre as doses, e eutanasiados para avaliação do perfil de imunoglobulinas séricas IgG total e subclasses IgG1 e IgG2a anti-Qui-A através do ensaio imunoenzimático ELISA e a produção das citocinas intracitoplasmáticas IL-2, TNF e IFN-γ por citometria de fluxo multiparamétrica. Observamos aumento na produção de IgG total e da subclasse IgG1 após imunização tanto com Qui-A quanto Qui-A/Poly ICLC, a qual também desencadeou a produção da subclasse IgG2a, sugestivos de uma resposta mista TH1/TH2. Adicionalmente, Qui-A/Poly ICLC estimulou o aumento do percentual de células T CD4+CD44+ e T CD8+CD44+ produtoras de IL-2, TNF e IFN-γ. Em murinos, um perfil de citocinas TH1, caracterizado por IFN-γ, estimula a expressão da subclasse IgG2a. Quando analisada a correlação entre a produção de IgG2a e o percentual de células T CD4+ ativadas produtoras de IFN-γ (IgG2a vs. CD4+CD44+IFN-γ+), o coeficiente de Spearman indicou correlação positiva moderada, confirmando que a imunização com Qui-A/Poly-ICLC favoreceu a ativação de células B, dependente de células T CD4+, secretoras de anticorpos específicos e, principalmente, promoveu a produção de IgG2a mediada por IFN-γ. Nossos achados evidenciam o potencialda proteína quimérica associada ao adjuvante Poly-ICLC em induzir imunidade protetora, com ênfase na produção de citocinas pró-inflamatórias e das imunoglobulinas IgG1 e IgG2a.