Purificação e atividade biológica de enzima do látex de Asclepias curassavica L.

Abstract

A pesquisa em produtos naturais é uma das áreas mais tradicionais da Farmácia e da Química no Brasil. Em uma revisão realizada entre 1981 e 2002 foi demonstrado que de um total de 868 fármacos 91 são compostos de origem biológica e de natureza proteica. A Asclepias curassavica L. pertencente à família Apocinaceae é uma planta perene sulamericana e popularmente empregada para, entre outras aplicações, tratamento de feridas e distúrbios gástricos. Fazendo parte dos constituintes bioativos presentes no látex desta espécie vegetal estão os glicosídeos cardiotônicos e enzimas proteolíticas. Estudos prévios, realizados no LAPLAMED/CiPharma da Escola de Farmácia/UFOP mostraram que o extrato bruto do látex da planta Asclepias curassavica L. apresenta atividade caseinolítica, fibrinogenolítica, fibrinolítica e colagenolítica. O presente trabalho mostra a purificação de uma enzima, a asclepaína, presente no látex da planta Asclepias curassavica L. coletada em pastagens da região de Ouro Preto. A purificação da asclepaína envolveu três etapas: precipitação com sulfato de amônio, cromatografia por troca iônica em CM-Sepharose e cromatografia de fase reversa em C8-Sepharose. Os experimentos de caracterização da asclepaína mostraram que essa enzima apresenta uma massa molecular de 24,5kDa, uma temperatura ótima na faixa de 30 a 40oC e um pH ótimo igual a 6,5. A enzima exibiu uma significante atividade gelatinolítica, fibrinogenolítica e fibrinolítica. A enzima exibiu atividade gelatinolítica e eficientemente hidrolisou as cadeias Aα seguida da hidrólise da cadeia Bß do fibrinogênio. O coágulo de fibrina também se mostrou um excelente substrato para a enzima estudada. A classe da asclepaína foi determinada utilizando inibidores específicos da protease, tais como TPCK, PMSF, N'etilmaleimida, TLCK, E-64, e ácido iodoacético. A atividade da enzima foi completamente inibida com 3,12μM de E-64 e significativamente inibida pela iodoacetamida e ácido iodoacético em concentrações acima de 12,5 μM, indicando que a asclepaína é uma cisteína protease. Os resultados obtidos sobre as características bioquímicas e farmacológicas da asclepaína traz grande motivação em avaliar futuramente se essa enzima possui atividade cicatrizante, principalmente voltado para o debridamento de feridas graves, como queimaduras e úlceras de decúbito.