Caracterização da atividade celulolítica de extratos proteicos de cupins com potencial para emprego na triagem de cupinicidas naturais.

Abstract

Dentre os métodos que vêm sendo testados para a eliminação de cupins como pragas destacam-se os cupinicidas de origem natural, feitos à base de plantas produtoras de metabólitos secundários com potenciais padrões moleculares bioativos. Esses cupinicidas apresentam-se como uma boa estratégia para o manejodos insetos de forma eficaz, acarretando mínimos danos ao meio ambiente e também à saúde do homem, em comparação ao controle químico atualmente realizado com grande frequência. O presente estudo tem como objetivo caracterizara atividade celulolítica de endoglucanases em extratos proteicos brutos de cupins com vistas à sua utilização na bioprospecção de cupinicidas naturais. Essa caracterização se encontra descrita na literatura como uma ferramenta importante de determinação da atividade enzimática, visto que as endoglucanases estão diretamente envolvidas na catálise da hidrólise da celulose em glicose durante o processo de digestão desse polímero no organismo dos cupins. Para isso, indivíduos adultos, dacasta dos operários foram coletados em fragmentos de madeira de um imóvel residencial infestado na região da Pampulha em Belo Horizonte- Minas Gerais, sendo utilizados na produção dos extratos. Parte dos indivíduos tiveram cabeça/tórax e abdômen separados para darem origem a extratosdiferentes. Foram preparados dois extratos proteicos: um de corpo inteiro do inseto,a partir da trituração de 45g de cupins inteiros, suspensos em tampão acetato de sódio a 0,1M em pH 5,5 para concentração de 10%. O outro extrato, somente da porção abdominal dos cupins, foi gerado por igual procedimento, a partir 5g de abdômen. As preparações foram homogeneizadas, centrifugadas e os sobrenadantes foram coletados, gerando os extratos brutos. A concentração total de proteínas foi determinada pelo método de Lowry. A atividade enzimática das endoglucanases foi mensurada através do ensaio empregando Carboximetilcelulose (CMC) como substrato, o que permitiu estimar a eficiência celulolítica pelo cálculo da sua atividade. O método Glicose-Oxidase (GOD) foi utilizado para a determinação da quantidade de glicose gerada na reação enzimática. No extrato bruto de cupins inteiros obteve-se concentração de proteínas 495 mg/ml e no extrato de abdômen670 mg/ml. Após calculadas as atividades das celulases, as eficiências de geração de glicose dos dois extratos produzidos foram comparadas diretamente e também a um extrato proteico purificado, obtido do fungo Trichoderma viride isolado de térmitas. Embora as atividades celulolíticas dos extratos brutos tenham se mostrado com

menores eficiências que a do extrato purificado do fungo, estas foram seguramente mensuráveis e estáveis, e já permitem sua aplicação em triagem de potenciais cupinicidas naturais, visto que o manejo mais utilizado para o controle de cupins atualmente são os inseticidas de origem sintética e estes são responsáveis por diversos danos na saúde do homem e do ecossistema .